Importancia de la identificación de las fuentes de incertidumbre en los métodos de ensayos microbiológicos y biotecnológicos

Abstract

La incertidumbre de las mediciones en los métodos de ensayos se debe a diversos factores, cada uno de ellos se calcula individualmente y se consideran un componente de la incertidumbre típica combinada, característica de los métodos complejos, en especial, aquellos donde la medición involucra una actividad biológica y sobre las cuales influyen diferentes factores. Identificar aquellos de efecto significativo, representa un paso fundamental en el cálculo de la incertidumbre de su medición. En este sentido, se presenta el análisis de las fuentes de incertidumbre en dos casos de estudio, el método de recuento en placa y el método de ensayo enzimático usando espectrofotometría UV-Vis. Los resultados se sintetizan y se representan gráficamente a través de un diagrama de causa y efecto, donde se presentan las posibles fuentes de incertidumbre que afectan ambos métodos y sirven de modelo conceptual para el análisis de otros similares. La exactitud de los resultados en la aplicación del método de recuento en placas, se centra en la capacidad del crecimiento de los microorganismos en condiciones de laboratorio y en los métodos de ensayo enzimáticos apoyados en la técnica espectrofotometría UV-Vis, están relacionados principalmente con las características intrínsecas de las enzimas, de sus propiedades como catalizador biológico y de la precisión en la medición espectrofotométrica. En ambos casos las condiciones ambientales del laboratorio, la naturaleza de las muestras y la experticia del analista también representan potenciales fuentes de incertidumbre en los métodos analizados.

The uncertainty of measurements in test methods is due to several factors; each of them is calculated individually and is considered a component of the combined standard uncertainty, characteristic of complex methods, especially those where the measurement involves a biological activity and which are influenced by different elements. To identify those with a significant effect represents a fundamental step in the calculation of their measurement uncertainty. In this sense, the analysis of the sources of uncertainty is presented in two case studies, the plate count method and the enzymatic assay method using UV-Vis spectrophotometry. The results are synthesized and graphically represented through a cause and effect diagram, where the possible sources of uncertainty affecting both methods are showed and serve as a conceptual model for the analysis of other similar ones. The accuracy of the results in the application of the plate count method, focuses on the growth capacity of microorganisms under laboratory conditions and in the enzymatic test methods supported by the UV-Vis spectrophotometry technique, they are mainly related to the intrinsic characteristics of enzymes, their properties as a biological catalyst and precision in spectrophotometric measurement. In both cases, the environmental conditions of the laboratory, the nature of the samples, and the expertise of the analyst also represent potential sources of uncertainty in the methods analyzed.